Optimización de la técnica de electroforesis en geles de poliacrilamida para la determinación de perfiles proteicos en hidrolizados por vía enzimática y en ensilados biológicos
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Date
2016
Authors
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Instituto Nacional de Investigación y Desarrollo Pesquero (INIDEP)
Abstract
SDS-PAGE es una técnica electroforética utilizada para la separación de proteínas de mezclas complejas. Al llevarse a cabo en condiciones desnaturalizantes, las proteínas pierden su conformación tridimensional y así se obtiene un fraccionamiento que obedece a la diferencia de peso y a la longitud de la cadena, migrando en relación a su masa cuando se aplica un campo eléctrico. En este trabajo se ha optimizado el método para aplicarlo a la separación de proteínas y péptidos de ensilados biológicos, harinas de pescado, hidrolizados, músculo y vísceras de pescado, ya que, una vez optimizado, es un método altamente reproducible y de costo relativamente bajo para poder utilizarse de rutina. Se ensayaron diferentes tratamientos de las muestras: cambios de pH; velocidades, temperaturas y tiempos de centrifugación; precipitación de las proteínas; variaciones en el tamaño de poro del gel; tiempo e intensidad del campo eléctrico aplicado a las corridas electroforéticas. En todos los casos se obtuvo una muy buena resolución de los perfiles proteicos, excepto en el caso de los hidrolizados enzimáticos que no presentan buena resolución de péptidos de bajo peso molecular (menor a 6 kDa) debido a que el buffer de corrida utilizado es Tris-Glicina, cuando para éstos casos se debería utilizar Tris-Tricina.
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Citation
Salomone, A.L. (2016). Optimización de la técnica de electroforesis en geles de poliacrilamida para la determinación de perfiles proteicos en hidrolizados por vía enzimática y en ensilados biológicos (Informe de Investigación, No. 14). Instituto Nacional de Investigación y Desarrollo Pesquero (INIDEP)