Eficiencia de extracción de ADN de un producto comercial (fenol: cloroformo: alcohol isoamílico), Específico para ARN
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Date
2016
Authors
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Instituto Nacional de Investigación y Desarrollo Pesquero (INIDEP)
Abstract
En el Gabinete de Biología Molecular y Microbiología del INIDEP se ha adoptado para algunos ensayos la extracción de ADN con fenol:cloroformo:isoamilalcohol por demandas relacionadas con los organismos y los tejidos en estudio. La presencia de muco y polisacáridos en general, requieren químicos específicos para obtener ADN de pureza alta ya que tienden a oxidarse o sufrir degradación enzimática con rapidez, aún con el tejido congelado. Se evaluó la eficiencia en la extracción de ADN del fenol:cloroformo:isoamilalcohol (P3803 de SIGMA), específico para trabajar con ARN, para su posterior uso en estudios moleculares. Se realizó la amplificación de dos marcadores genéticos, los ISSR y un gen mitocondrial, COI, en peces y bivalvos. Como controles se usó el ADN extraído de ejemplares ensayados con anterioridad con los mismos marcadores y con productos de rutina. La extracción de ADN realizada en vieiras, anchoíta, caballa y gatuzo realizada con el producto P3803 de Sigma-Aldrich tuvo como resultado un ADN de pureza y calidad aceptable (entre 1,32 y 2,03), similar al obtenido con otros productos comerciales. Las diferencias obtenidas en cuanto a concentración entre ambos tipos de extracción no fueron estadísticamente significativas. Los ensayos de PCR para los marcadores ISSR y citocromo oxidasa I resultaron en amplificaciones satisfactorias, si bien se recomienda que se realicen las pruebas adecuadas antes de utilizar un producto diferente en los análisis con marcadores.
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Citation
Trucco, M.I.; Andreoli, G. (2016). Eficiencia de extracción de ADN de un producto comercial (fenol: cloroformo: alcohol isoamílico), Específico para ARN (Informe de Investigación, No. 9). Instituto Nacional de Investigación y Desarrollo Pesquero (INIDEP)